全自动蛋白转膜仪怎么用？一文看懂操作流程与注意事项

全自动蛋白转膜仪是一种用于将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶高效转移到膜（如PVDF膜或硝酸纤维素膜）上的实验仪器，广泛应用于Western Blot等分子生物学实验中。相较传统的半干式或湿转方式，全自动蛋白转膜仪操作更简便，转印速度更快，尤其适用于高通量实验场景。那么，如何正确使用全自动蛋白转膜仪？以下为标准操作流程及关键注意事项。

一、准备工作

样品电泳：首先完成SDS-PAGE电泳步骤，分离目标蛋白。

预处理膜和凝胶：如使用PVDF膜，需先在甲醇中浸泡1分钟活化，再转入转印缓冲液中；凝胶则需用转印缓冲液充分平衡，通常需浸泡5–10分钟。

准备转印缓冲液：可使用设备配套的高效快速转膜缓冲液母液稀释配制，按推荐比例配制所需体积。

二、组装转印夹层（转印“夹心”）

转印“夹心”结构从阳极到阴极一般为：

阳极板 → 滤纸 → 膜 → 凝胶 → 滤纸 → 阴极板。

操作时需确保膜与凝胶之间贴合紧密、无气泡，可使用玻璃棒或移液枪轻压排气。

三、设置转印条件

开机操作：开启全自动蛋白转膜仪，进入主界面。

程序设定：可通过7寸液晶触摸屏输入转印参数，如电压、时间及电流强度等。常见参考参数为：

分子量 ≤ 70 kDa：25V，7分钟

分子量 ≤ 100 kDa：25V，10分钟

分子量 ≤ 180 kDa：25V，15分钟

程序调用：仪器支持最多保存25组自定义运行程序，用户可直接调用已有设置，避免重复操作。

四、启动转印并监控过程

启动设备后，系统将自动控制电流并执行设定的转印程序。运行过程中，屏幕会实时显示转印状态，包括电压、电流和剩余时间等，便于实验者监控。

五、取出膜并后续处理

转印完成后，打开转印模块，取出膜。此时蛋白已由凝胶成功转移至膜表面，可继续进行封闭、抗体孵育、显色或化学发光等后续步骤。

六、注意事项

确保膜与凝胶大小一致，并准确对齐。

所有耗材（滤纸、膜）需充分浸润在缓冲液中，避免干燥引起转印不完全。

转印前检查设备接触良好，避免电极连接异常导致效率下降。

不建议超过推荐时间，以免小分子蛋白穿膜或背景增高。

结语

全自动蛋白转膜仪通过集成式设计和自动化控制，简化了蛋白转印流程。只需按步骤完成准备、设定和运行，便可在短时间内获得高质量转印结果，是现代分子实验室提高效率、保障数据一致性的理想选择。